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熒光PCR儀常見故障的解決辦法很簡單

更新時間:2022-08-09瀏覽:7296次

  實時熒光定量PCR是一種在DNA擴增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過內(nèi)參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。
  熒光PCR方法檢測病原體已成為常規(guī)檢測技術(shù),在工作過程中我們也遇到了各種各樣、千奇百怪的問題,那么在PCR儀出現(xiàn)故障的時候應(yīng)該怎么解決呢?
  01反應(yīng)后反應(yīng)管壁出現(xiàn)液滴?
  原因1:運行程序前沒有開啟熱蓋加熱功能
  解決方法:開啟熱蓋加熱功能
  原因2:反應(yīng)結(jié)束后低溫保存時間過久
  解決方法:運行結(jié)束后,熱蓋將自動關(guān)閉,所以冷凝會自然出現(xiàn),這不會對實驗結(jié)果產(chǎn)生影響,將反應(yīng)管置于離心機上瞬時離心機使液滴回到管子底部即可。
  02反應(yīng)管氣泡在 PCR 反應(yīng)時,加熱破裂
  反應(yīng)時在實驗過程中出現(xiàn)了氣泡,導(dǎo)致中途產(chǎn)生了較大的波動,其特點是單個樣本的幾個通道的熒光曲線同時在某個循環(huán)出現(xiàn)趨勢一致的波動。
  分析原因:氣泡在 PCR 反應(yīng)的過程中被加熱,在某個時刻破裂,此時出現(xiàn)熒光擾動,在這個循環(huán)檢測到的熒光型號和上一個循環(huán)不一樣,此時如果波動位于基線期很可能就被軟件識別為開始擴增的拐點,擴增曲線就會產(chǎn)生結(jié)果。
  03使用微孔板,
  反應(yīng)后反應(yīng)液有明顯蒸發(fā)?
  方法1:確保使用高質(zhì)量的微孔板,反應(yīng)前要嚴(yán)格密封;
  方法2:確保蓋熱蓋,適當(dāng)提高熱蓋的溫度;
  方法3:增大反應(yīng)體積。
  04使用PCR管,
  反應(yīng)后PCR的管內(nèi)反應(yīng)液有明顯蒸發(fā)?
  方法1:確保使用高質(zhì)量的PCR管;
  方法2:在樣品臺的四角放置四個同樣的空PCR管,以保證熱蓋壓在哥PCR管上的壓力均勻。
  05PCR實驗結(jié)束后,
  樣品可以一直放在PCR儀中低溫保存嘛?
  當(dāng)程序運行結(jié)束后,及時取出樣品并停止儀器運行,而不要把儀器當(dāng)“冰箱”使用,低溫保存時溫度盡量設(shè)定得比較高,如8℃,這可以延長儀器的使用壽命。

 

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